Immunofixation: Hva er det? Hvorfor er det utført? Resultater av G.Bertelli

generalitet

Immunfiksering er en laboratorietest som muliggjør identifisering og typifisering av gamma globuliner tilstede i en biologisk prøve.

I detalj lar analysen - i pasientens blod eller urin - studere immunoglobulinklassene (IgA, IgG, IgM, IgE eller IgD) og typen lettkjede kappa eller lambda, i henhold til deres spesifikke elektroforetiske mobilitet . For å identifisere hvilken gammaglobulin som er involvert, involverer immunfiksering deretter inokulering av spesifikke antigener for fragmentet eller det tilsvarende antistoff ( anti-immunoglobulin-antisera ): tilstedeværelsen av den mistenkte endringen er bekreftet av formasjonen av et bunnfall, synlig for det blotte øye eller mikroskop.

Denne informasjonen er av stor betydning for å etablere spesielt diagnosen av plasmakellens patologier (gammopatier eller plasmacelldyscrasier). Immunfiksering er svært nyttig for evaluering og overvåking av myelom, Waldenströms makroglobulinemi og primær amyloidose (også kalt amyloidose i lettkjede).

Hva

Immunfiksering (eller immunoelektroforese, også forkortet i akronym IFE ) er en teknikk som er i stand til å bestemme om og hvilken klasse av immunoglobuliner (IgG, IgM, IgA, IgD, IgE) eller type lettkjede kappa eller lambda, er tilstede i overskudd eller mangel i pasientens blodserum og urin.

Kappa- og lambda-lyskjeden karakteriserer den monoklonale komponenten, dvs. antistoffene med samme identiske kjemiske struktur.

Serum og urinveisinfeksjon: når er det angitt?

Plasmacellulære dysplasier eller gammopatier er en heterogen gruppe av lidelser med ukjent etiologi kjennetegnet ved:

• Disproportionell proliferasjon av en B-celleklon ;
• Tilstedeværelse i serum og / eller urin av en type immunoglobulin (eller dens polypeptidunderenhet), strukturelt og elektroforetisk homogen ( monoklonal ).

Normalt diagnostiseres plasmacelldyscrasier ved hjelp av elektroforese av serum- og urinproteiner, etterfulgt av serumimmunfiksering (IFE).

Samtidig kan en blodprøve foreskrives for å måle total konsentrasjon av immunoglobuliner (IgG + IgM + IgA).

For å lære mer: Immunoglobuliner - hva de er, hvordan de blir målt og referanseverdier »

Immunfiksering: grunnleggende prinsipp

Immunfiksering er en undersøkelse som involverer to faser (først elektroforese i agarosegel, deretter immunutfelling med spesifikk antisera ).

Det første trinnet med immunfiksering er det samme som for ELECTROPHORESIS av proteiner (eller protidogramma), derfor er det nødvendig å huske noe konsept:

• Elektroforese er en laboratorieanalyse som gjør det mulig å bestemme mengden proteiner som er tilstede i blodserumet eller i andre biologiske prøver, og for hver brøkdel avslører om det er noen avvik i form av kvalitet. Spesielt gir denne undersøkelsen separering av proteiner i fem grupper: albumin, alfa 1-globulin, alfa 2-globulin, beta-globulin og gamma-globulin ; sistnevnte undersøkes mer spesifikt med immunfiksering.

• Elektroforese er en separasjonsmetode basert på den forskjellige migrasjonshastigheten til elektrisk ladede partikler gjennom en oppløsning og et inert støttemedium under påvirkning av et elektrisk felt generert av en likestrøm. I praksis utnytter prøven den elektriske ladningen og molekylmassen av proteiner som er tilstede i pasientens prøve. Under impuls av et elektrisk felt migrerer disse makromolekylene og "grupperer" etter type, og reagerer på stress på en karakteristisk måte. Resultatet ( elektroforetisk sporing ) består av forskjellige topper og kurver, til hvilke proteinfraksjonene korresponderer. Normalt er den første toppen, høyere og smalere, den for albumin ; å følge, observerer vi globulintoppene, mye lavere enn albumin. Økningen eller reduksjonen i amplitude og intensitet av toppene som danner i stien indikerer en større eller mindre forekomst av proteiner i hver kategori; jo flere proteiner er til stede i et bånd, desto høyere er den respektive toppen. Når det gjelder gamma-globuliner, vil det være nødvendig å ty til enkeltdosering hvis man vil vite mengden av hver av de forskjellige klassene (IgA, IgM, IgG etc.). Generelt er flere gamma-globuliner tilstede i et bånd, jo høyere er den respektive toppen; høyden tilsvarer den totale mengden proteiner som tilhører en bestemt kategori.

For å finne ut mer om det: Serumproteinelektroforese - hva det er, veibeskrivelse og resultater »

IMMUNOFISSATION gir:

1) Agarosegelektroforese : pasientens prøve (serum eller urin) er avsatt på en elektroforetisk stripe, dvs. støtte for migrasjon (vanligvis agarosegel). Ved anvendelse av et elektrisk felt, generert av en likestrøm, oppnås separering i forskjellige bånd. I praksis migrerer hver type gamma-globulin som er tilstede i blandingen (dvs. i pasientprøven) basert på molekylmassen og den elektriske ladningen. Den forskjellige elektroforetiske mobiliteten til gamma globuliner gjør det mulig å identifisere dem (hver av disse sammenfaller med et spesifikt bånd i elektroforetisk vei) og observere eventuelle anomalier.

2) Immunpresipitasjon med spesifikk antisera (Fiksering) : Spesifikke antigener for et spesifikt antistoff eller fragment blir tilsatt individuelt til hver elektroforetisk strimmel (anti-IgG, anti-IgA, anti-IgM, anti-light kappa eller anti-kjede) lambda lettkjede). Hvis et monoklonalt protein er tilstede, vil samspillet mellom antigenet og det tilsvarende antistoff produsere et smalt bånd (dette betyr at resultatet er positivt) og dannelsen av et bunnfall, synlig for det blotte øye eller mikroskop. Til slutt blir prøven behandlet (dvs. vasket og farget) for å fjerne proteiner som ikke har falt ut, for å oppnå tørking av gelen og fortsette med lesing av resultatene.

Hvorfor går det

Hva er Immunofixation for?

Serumimmunfiksering er en undersøkelse indisert for å diagnostisere eller overvåke sykdommer karakterisert ved en forandring av gamma-globuliner, spesielt når det gjelder fremstilling av den monoklonale komponenten ( monoklonal gammopati ).

For å lære mer: Monoklonale Gammopatier - Hva og hvilke er »

Immunfiksering er nyttig i tilfeller av mistanke om plasmacelldyscrasi og er grunnleggende for studiet av MIELOMA (og relaterte patologier) og MGUS (et akronym for "monoklonale gammopatier med uklar betydning").

Denne testen tillater oss også å vurdere Waldenströms makroglobulinemi og lettekjedede amyloidose ( AL ).

Immunfiksering: Når er undersøkelsen foreskrevet?

Indikasjonen for immunfiksering følger etter klinisk eller laboratoriebevis som vekker mistanke om endringer av monoklonale antistoffer eller immunoglobuliner i serum eller urin.

Eksempelvis tillater denne undersøkelsen å fordyre resultatet av seroprotektiv eller urinelektroforese: når i elektroforetisk sporing, båndene som korresponderer med gammaglobulinene avviker fra normalitet, identifiserer immunfiksjonen hvilket av disse proteiner som er endret i form av mengde og kvalitet.

Sammendrag kan serumimmunfiksering foreskrives:

• I tilfelle der andre laboratorietester gir et unormalt resultat, når det gjelder fravær eller mindre og større mengde plasmaproteiner i forhold til normen;
• Når tilstedeværelsen av sykdommer karakterisert ved produksjon av en monoklonal komponent er mistenkt, slik som:
  • Multipelt myelom og dets varianter;
  • Waldenströms makroglobulinemi;
  • amyloidosis;
• Når pasienten utvikler symptomer og tegn som indikerer tilstedeværelsen av en monoklonal gammopati eller multiple myelom, slik som:
  • Bonesmerter;
  • anemi,
  • Enkel tretthet;
  • Gjentatte infeksjoner;
  • Uforklarlige brudd.

I tilfelle av multiple myelomer er elektroforeseen av proteiner og immunfiksering av stor nytte også for å overvåke sykdomsfremdriften (oppfølging).

Immunfiksering: hvilke prøver kan utføres?

De biologiske prøvene som kan bli utsatt for immunfiksering er hovedsakelig:

• Serum (serumimmunfiksering);
• Urin (urin immunfiksering);
• Alkohol * (væskeimmunfiksering).

* Merk : CSF eller cerebrospinalvæske er væsken som gjennomsyrer og beskytter hjernen, ryggmargen, kranialnervene og ryggradene.

Normale verdier

Et negativt resultat av serum- og urinimmunfiksering for monoklonale eller polyklonale gamma-globuliner regnes som NORMAL .

Gamma globuliner

Gamma globuliner utgjør 9-20% av totale plasmaproteiner.

• Referanseverdi Gamma globulin : 0, 9-1, 4 g / dl

Når det gjelder total konsentrasjon av immunoglobuliner ( IgG + IgM + IgA ) antas det at verdier mellom 600 og 2300 mg / dl er normale.

• Referanseverdi Immunogobuliner i serum :
  • IgA : 90-400 mg / dl
  • IgG : 800-1800 mg / dl
  • IgM : 60-280 mg / dl
  • IgD : 0, 3-0, 4 mg / dl
  • IgE : 20-440 mg / dl

Merk : Eksamens referanseperiode kan variere noe avhengig av alder, kjønn og instrumentering som brukes i analyselaboratoriet. Av denne grunn er det å foretrekke å konsultere utvalgene som er oppført direkte på rapporten. Det skal også huskes at resultatene av analysene må vurderes som helhet av legen, som kjenner pasientens medisinske historie.

Høye verdier - årsaker

Økningen i gamma globuliner kan være:

• Polyklonale, hvis produksjonen av immunglobuliner er heterogen, det vil si at alle komponentene i gamma-globulinene - produsert eller avledet fra forskjellige plasmaceller - påvirkes av økningen;
• Monoklonal, når gamma-globuliner er produsert eller avledet fra en enkelt type (klon) av plasmaceller.

Økningen i polyklonale gammaglobuliner kan være assosiert med:

• Kroniske inflammatoriske sykdommer;
• Revmatoid artritt;
• Systemisk lupus erythematosus;
• Kroniske leversykdommer (som hepatitt og cirrhosis);
• Akutte og kroniske infeksjoner;
• Nylige immuniseringer;
• Noen svulstsykdommer.

Høye verdier av monoklonale gamma-globuliner kan indikere, i stedet, tilstedeværelsen av:

• Noen neoplasmer og kroniske betennelser;
• Multipelt myelom;
• lymfom;
• Waldenströms makroglobulinemi.

Et overskudd av gammaglobulin kalles hypergammaglobulinemi, mens en mangel er kjent som hypogammaglobulinemi .

Lavt verdier - Årsaker

Reduksjonen av gammaglobuliner kan indikere tilstedeværelsen av ulike sykdommer i immunsystemet på genetisk basis, inkludert agammaglobulinemi eller en sekundær immundefekt (for eksempel aids, nyresvikt, akutt sepsis og Cushings syndrom).

Nedgangen i gamma-globulinverdier kan også avhenge av bruken av cytostatika, immunosuppressive midler og steroider.

Hvordan det blir utført

Serumimmunfiksering

Serumimmunfiksering innebærer en enkel blodtrekk fra venenes vener. Serumet er oppnådd ved sentrifugering av den biologiske prøven; Dette tillater faktisk å separere fraksjonen som inneholder cellene (korpuskulær del) fra væsken i blodet (plasma). Blodserumet er fri for koagulasjonsfaktorer (fibrinogen, faktor VIII, faktor V og protrombin).

Urinær immunfiksering

For å utføre urinimmunfiksering er det nødvendig å samle en liten mengde urin i en spesiell steril beholder. Basert på indikasjoner på legen og laboratoriet, kan prøven oppsamles uten en presis tidsposisjon ( tilfeldig ) eller innen 24 timer .

Immunfiksering av brennevin

Analysen krever at en liten mengde cerebrospinalvæske tas gjennom innsetting av en nål, inne i rygghulen ( lumbal punktering ).

forberedelse

Immunofixation: hvordan forbereder du deg på eksamen?

• Før blodprøvetaking, kan noen laboratorier kreve at du observerer en rask på minst 10-12 timer. I løpet av denne tiden er en liten mengde vann tillatt.
• Immunfiksering kan utføres på urin samlet på et bestemt tidspunkt på dagen (tilfeldig) eller i løpet av 24 timer, så det er nødvendig å skaffe de passende sterile beholderne på forhånd.
• Når det gjelder immunfiksering av væsken, er det ikke nødvendig med noe spesielt preparat.

Hva kan endre utfallet av eksamenen?

Enkelte legemidler kan påvirke utfallet av immunfiksering, så det anbefales at du rapporterer eventuelle pågående legemiddelbehandlinger til legen.

I seks måneder før undersøkelsen kan administrasjon av vaksiner (immunisering) og bruk av rusmidler, som fenytoin, prokainamid, orale prevensiver, metadon og terapeutisk gammaglobulin, øke konsentrasjonen av immunglobuliner. Andre legemidler som kan endre testresultatet er kortikosteroider, neomycin, acetylsalisylsyre og klorpromazin.

Tolkning av resultater

Resultatet av immunfiksering vurderes i kombinasjon med utfallet av andre analyser. Fortolkningen av funnet er ansvaret til den praktiserende lægen eller referansespesialisten som kan identifisere og sammenligne endringene som påvirker en bestemt gammaglobulin (for eksempel båndet som faller sammen med immunoglobulinene G) til visse sykdommer. Denne evalueringen bekrefter eller støtter den diagnostiske hypotesen: Generelt kan immunfiksering avsløre en normal gammaglobulinprofil eller identifisere et monoklonalt protein eller en polyklonal modell .

Når sykdommen er definert, kan immunfiksering utføres for:

• Overvåk sykdommen over tid, følg deretter kurset (oppfølging);
• Kontroller effektiviteten til den terapeutiske protokollen .

Fordeler og ulemper med immunofixering

Sammenlignet med proteinelektroforese, immunfiksering:

• Det er raskere : Resultatene av immuniseringen oppnås vanligvis innen tre timer;
• Det er mer følsomt (om enn lite): immunfiksering kan avsløre et immunoglobulin som ikke er utelatt fra proteinelektroforese, spesielt i lave konsentrasjoner (mindre enn 1 gram / liter).

Videre er immunfiksering:

• Det kan være delvis automatisert ;
• Det er lett å lese og tolkes .

Imidlertid er immunfiksering dyrere enn proteinelektroforese og tillater kun gamma-globulinanalyse .

Normalt resultat

Ved immunfiksering inkluderer en vanlig bane:

• Et bånd som faller sammen med mørkere immunoglobulin G ( IgG );
• Et bånd som tilsvarer det letteste immunoglobulin A ( IgA );
• Fraværet av båndet for immunoglobulin M ( IgM );
• Kappa- båndet er tettere enn det for lambda (lettkjede), med et forhold på 2: 1.

I et normalt resultat er båndene store og det er en gradvis og jevn reduksjon i fargetettheten mot kanten av immunoelektroforesebåndet.

Polyklonale gamma-globuliner

I noen tilfeller er alle immunfiksjonsbåndene jevnt skjult i samme grad. Denne modellen representerer tilstedeværelsen av polyklonale immunoglobuliner . Også i dette tilfellet er båndene brede og overgangen til kantene av den immunoelektroforetiske stripen er gradvis. IgM-bandet - vanligvis fraværende - er bredt.

Monoklonale gamma globiner

Når et smalt bånd med skarpe kanter kan identifiseres i immunforbindelsesruten, betyr det at søket etter monoklonale komponenter er positivt .

Identifikasjonen av et monoklonalt immunoglobulin er nyttig ved diagnosen av følgende betingelser:

• Monoklonal gammopati av ubestemt betydning (MGUS);
• Multipelt myelom;
• Waldenstroms makroglobulinemi;
• Amyloidose.

Videre kan immunfiksering brukes til å overvåke behandlingen i plasmacelldyscrasier (dvs. multippel myelom og Waldenstroms makroglobulinemi). Hvis nivået av monoklonalt protein reduseres eller ikke kan påvises etter kjemoterapi, kan det indikere et respons på behandlingen . I motsetning til dette er et monoklonalt protein som vedvarer til tross for behandling et tegn på ildfast sykdom .

Vær oppmerksom på . Et negativt immunfikseringsresultat utelukker ikke alltid en plasmacelldyscrasi. For eksempel kan et ikke-sekretorisk myelom eller oligosekretorisk gi negative resultater både i urin og i serum. Derfor, hvis den diagnostiske mistenkelsen for gammopati fortsatt er høy, er bestemmelsen av forholdet mellom Kappa / Lambda Libere Light Chains ( K / L-forholdet ) indikert.

Immunfiksering og diagnose av multippel sklerose

Immunfiksering av cerebrospinalvæske (væske) foreskrives når legen mistenker tilstedeværelsen av multippel sklerose . I dette tilfellet er banen som er bestemt karakteristisk, siden den fremhever tilstedeværelsen av de såkalte oligoklonale båndene . Resultatet er rapportert i laboratorierapporten som positiv . Det bør vurderes at båndene vanligvis ikke observeres i serumimmunfiksering, da de korrelerer med produksjonen av intratekale gammaglobuliner .

Det skal imidlertid bemerkes at dette funnet ikke nødvendigvis bekrefter diagnosen, siden andre forhold kan oppstå med oligoklonale bånd i cerebrospinalvæsken.

Med andre ord er identifikasjonen av oligoklonale bånd med væskeimmunfiksering meget nyttig for å støtte diagnosen multippel sklerose, men må bekreftes av andre undersøkelser . Andre forhold som kan gi dette resultatet er betennelser i sentralnervesystemet, inkludert: HIV-relatert encefalitt, neurosyphilis, neurosarcoidose, Lyme meningoencefalitt, CNS-maligniteter, optisk neuromyelitt og transversell myelitt.