Essay ABTS
Det er en analytisk metode som bruker en spektrofotometrisk måling for å bestemme antioxidantkapasiteten til en prøve. Ved bruk av et UV-Vis-spektrofotometer måles absorbansen av en oppløsning som inneholder den radikale ABTS • +, oppnådd ved oksidasjon av ABST (2, 2'-azinobis (3-etylbenzotiazolin-6-sulfonat), en fargeløs substans i form radikaler er farget ved å absorbere ved bølgelengde egenskaper i det synlige området. Tilsetningen til løsningen av ABTS • + av antioksidantmolekyler, som kan virke ved å overføre både hydrogen og et elektron, bestemmer reduksjonen av radikalet til den fargeløse formen, med etterfølgende misfarging av reaksjonsblandingen. Denne bleking, proporsjonal med mengden av antioxidant tilstede, kan måles som en reduksjon i absorbans over en viss tid ved en bestemt bølgelengde (734 nm). Antioxidantkraften uttrykkes ved sammenligning med absorbansverdiene målt for kjente mengder av et antioxidantmolekyl valgt som referansestandard, som vanligvis er ascorbinsyre eller trolox (i dette tilfelle vi snakker om TEAC Trolox ekvivalent antioksidantkapasitet antioksidant aktivitet.
Effektmåling basert på bruk av ABTS har fordelen av å være enkel og rask. Videre tillater det måling av antioxidantstoffer både hydrofile og lipofile i et bredt pH-område. Det må imidlertid tas i betraktning at radikalet som brukes (ABTS • +) ikke er fysiologisk og ikke er tilstede i biologiske systemer, og at problemer med repeterbarhet av måling på grunn av reaksjonskinetikken til de forskjellige involverte antioksidanter ofte blir fremhevet.
FRAP (Ferri Reducing Antioxidant Power)
FRAP-testen måler reduksjonen av antioksidanter mot jernioner. Det er en metode basert på elektronoverføring, der jernioner passerer fra Fe3 + til Fe2 +. Under visse betingelser av pH (3.6) og i nærvær av TPTZ (2, 4, 6-tris (2-pyridyl) -s-triazin) danner disse ioner komplekser med forskjellige egenskaper, spesielt det reduserte derivat (Fe2 + -TPTZ) antar en blå farge som har maksimal absorpsjon ved 593 nm som kan måles spektrofotometrisk. Reduksjonskapasiteten til en antioksidant substans kan derfor måles som en forandring i absorbansen av løsningen inneholdende oksidanten ved bølgelengden etablert ved sammenligning med variasjonen i forhold til en standard (f.eks. Ascorbinsyre).
FRAP-testen ble designet for å måle plasmaets reduserende kraft, men ble deretter tilpasset for å teste antioxidantkapasiteten til rene forbindelser og komplekse matriser. Faktisk, siden denne metoden gjør det mulig å evaluere kun reduksjonskapasiteten ved hjelp av elektronoverføring, fullstendig ignorere virkningen av antioksidanter som virker gjennom hydrogenoverføring, tillater det ikke å måle molekylers bidrag, slik som tioler og proteiner, som spiller en antioxidantrolle grunnleggende i biologiske væsker (f.eks. blod). Fordelen med å bruke denne metoden er at den er en av de enkleste, raskeste og minst kostbare metoder for å bestemme antioxidantkapasiteten in vitro.
DPPH TEST
2, 2-difenyl-l-pikrilhydrazyl (DPPH •) er et veldig stabilt og kommersielt tilgjengelig nitrogenradikal, karakterisert ved en intens lilla rød farge som duller når den reduseres i nærvær av et molekyl med antioxidantkapasitet. Ved spektrofotometrisk måling ved 517 nm av endringen i absorbansen av DPPH-løsningen etter reaksjon med en antioxidantforbindelse, er det mulig å kvantifisere reduksjonsevne av teststoffet om det virker med hydrogenoverføring eller elektronoverføring. Resultatet er generelt uttrykt som IC50, dvs. mengden av antioksidant som er i stand til å redusere den opprinnelige DPPH-konsentrasjonen med 50%.
Dette er en rask, enkel og rimelig metode. Grensene for denne analytiske teknikken er gitt ved muligheten for at resultatene av analysen blir forvrengt i tilfelle hvor de molekyler som undersøkes absorberer i det samme bølgelengdeområdet av DPPH-radikalet eller i nærvær av store molekyler sterkt huddled som ikke de kommer til å reagere med den reaktive delen av radikalet. Dette får DPPH til å reagere med antioksidanter opptil 1000 ganger sakte enn peroksylradikaler.
PCL TEST (Photochemiluminescence)
PCL-testen er basert på reaksjonen av en spesifikk radikalart, superoksydanionen (O2 • -), generert fotokjemisk ved UV-stråling, med en forbindelse som er i stand til å utstede kjemiluminescens. Markøren som brukes er luminol, et molekyl som ved oksydasjon av frie radikaler avgir et lys som kan måles ved hjelp av et spesielt instrument (Photochem®). Tilstedeværelsen av antioksidantstoffer i rasjonsblandingen deaktiverer de radikale arter som hemmer utslipp av kjemiluminescens. PCL analyse er veldig rask og sensitiv. Videre kan bidraget til den totale antioxidantkapasiteten til den vannløselige komponenten (flavonoider, vitamin E) ved anvendelse av to forskjellige analytiske protokoller, kalt ACW (Antioxidant Capacity Water Soluble) og ACL (Antioxidant Capacity Lipid), måles for samme forbindelse. C, aminosyrer, etc.) enn den liposløselige en (tokoferoler, tocotrienoler, karotenoider, etc.). Antioxidantkapasiteten til produktet under undersøkelse oppnås ved å sammenligne verdiene som er registrert med målingene knyttet til standardreferansemolekyler, ascorbinsyre for ACL-protokollen og Trolox for ACW-protokollen.
